抗體純化鹽析法即飽和硫酸銨沉淀法是檢驗(yàn)主任醫(yī)師考試涉及到的重要知識(shí)點(diǎn)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)為了幫助大家復(fù)習(xí)，整理了相關(guān)內(nèi)容，具體如下：

該純化方法是基于在待純化免疫血清中加入飽和硫酸銨溶液，由于抗體也是一種蛋白質(zhì)，其在水溶液中的溶解度是由其本身攜帶的親水基團(tuán)數(shù)和電荷數(shù)決定的，當(dāng)我們向抗血清中加入飽和硫酸銨溶液后，硫酸根離子和銨根離子與抗體競(jìng)爭(zhēng)溶液中的水分子，因?yàn)榱蛩岣x子和銨根離子與抗體分子相比，具有更強(qiáng)的親水性，因此抗體分子表面的水化膜被破壞，同時(shí)其暴露出來(lái)的帶電基團(tuán)被溶液中的鹽離子所中和進(jìn)而導(dǎo)致其溶解度大大降低，依據(jù)此原理從而將其從抗血清中分離。

具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：

將5ml抗血清與0.01M PBS在離心管內(nèi)等體積混合，向其中加入10ml飽和硫酸銨溶液，邊滴加邊搖勻，然后置于2到8攝氏度靜置過(guò)夜。

將步驟a中的待分離物于離心機(jī)內(nèi)離心，8000r/min離心15到20分鐘，除上清。

將步驟b中離心后的沉淀用2ml 0.01M PBS 溶解，然后緩慢加入3ml 飽和硫酸銨溶液，邊滴加邊搖勻，然后置于2到8攝氏度靜置2小時(shí)。

將步驟c中的待分離物于離心機(jī)內(nèi)離心，8000r/min離心15到20分鐘，除上清。

將步驟d中離心后的沉淀用1.65ml 0.01M PBS 溶解，然后緩慢加入3.35ml 飽和硫酸銨溶液，邊滴加邊搖勻，然后置于2到8攝氏度靜置2小時(shí)。

將步驟e中的待分離物于離心機(jī)內(nèi)離心，8000r/min離心15到20分鐘，除上清。

將步驟f中離心后的沉淀用1ml 0.01M PBS 溶解， 轉(zhuǎn)移到MD 14000透析袋內(nèi)，用0.01 M PBS進(jìn)行透析，透析4次以上，每次至少1小時(shí)以上。