抗凝物質(zhì)測定主要有如下四種:抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ:A)測定、血漿蛋白C(PC)測定、血漿蛋白S測定和血漿活化蛋白C抵抗(APCR)試驗(yàn)。
1.抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ:A)測定
(1)血漿抗凝血酶Ⅲ活性測定
1)原理:發(fā)色底物法:受檢血漿中加入過量凝血酶,使AT-Ⅲ與凝血酶形成1:1復(fù)合物,剩余的凝血酶作用于發(fā)色底物S-2238,釋出顯色基因?qū)ο趸桨罚≒NA),顯色的深淺與剩余凝血酶呈正相關(guān),而與AT-Ⅲ呈負(fù)相關(guān)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出AT:A的含量。
2)參考范圍:108.5%士5.3%。
?。?)血漿抗凝血酶Ⅲ抗原(AT:Ag)檢測
1)原理:免疫學(xué)方法如火箭電泳法、免疫酶標(biāo)及免疫比濁法。
2)參考范圍:0.29±0.06g/L。
3)臨床意義:①增高見于血友病、白血病和再生障礙性貧血等的急性出血期以及口服抗凝藥物治療過程中。②減低見于先天性和獲得性AT-Ⅲ缺乏癥,后者見于血栓前狀態(tài)、血栓性疾病和肝臟疾病、腎病綜合征等。
4)評價:①標(biāo)本不能用肝素抗凝。②AT-Ⅲ抗原和活性測定最好同時檢測,以利于進(jìn)行先天性AT-Ⅲ缺乏的分型。③在疑難DIC診斷時,AT-Ⅲ水平下降具有診斷價值;急性白血病時AT-Ⅲ水平降低更可看作是DIC發(fā)生的信號;抗凝治療中,如懷疑肝素抵抗,可測定AT-Ⅲ來確定;抗凝血酶代替治療時,也應(yīng)首選AT-Ⅲ檢測來監(jiān)測。
2.血漿蛋白C(PC)測定
(1)血漿蛋白C活性測定
1)原理:血漿蛋白C活性(PC:A)測定,發(fā)色底物法:受檢血漿中加入蛋白C激活劑(從蛇毒中提取)。PC被激活為活化蛋白C(APC),APC作用于發(fā)色底物Chromozym PCA,釋出顯色基團(tuán)對硝基苯胺(PNA),顯色的深淺與受檢血漿中PC的含量成平行關(guān)系。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出AT:A的含醫(yī)學(xué).教育.網(wǎng).收集整理量。
2)參考值:100.24%±l3.18%。
(2)血漿蛋白C抗原測定
1)原理:血漿蛋白C抗原(PC:Ag)檢測,免疫火箭電泳法。
2)參考值:102.5%±20.1%。
3)臨床意義:減低:①見于先天性PC缺陷:根據(jù)PC:A和PC:Ag可分為Ⅰ型(PC:Ag與PC:A均減低)和Ⅱ型(PC:Ag正常而PC:A減低);②獲得性PC缺陷:DIC、肝功能不全、手術(shù)后、口服雙香豆素抗凝劑、呼吸窘迫綜合征等。
3.血漿蛋白S測定
?。?)血漿總蛋白S測定
1)原理:血漿總蛋白S(TPS)包括游離PS(FPS)和與補(bǔ)體C4結(jié)合的PS(C4bp-PS)。由于二者對于抗人蛋白S抗體有相似反應(yīng),因此用免疫學(xué)方法(如火箭電泳、酶聯(lián)免疫法)檢測的是TPS。
2)參考值:97.56%±9.76% 。
3)臨床意義:減低:見于先天性和獲得性PS缺陷癥,后者見于肝臟疾病、口服抗凝藥物等。
?。?)血漿游離蛋白S(FPS)測定:
1)原理:凝固法。受檢血漿中加入乏PS基質(zhì)血漿(提供除PS外的其他凝血因子),PS可促進(jìn)APC對因子V a的抑制作用,纖維蛋白形成所需的時間與受檢血漿中FPS的量成正相關(guān)。受檢者凝固時間可從標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算出FPS的含量。
2)參考值:100.9%士29.1%。
3)臨床意義:參見血漿總蛋白S測定。
4.血漿活化蛋白C抵抗(APCR)試驗(yàn)
?。?)原理:在受檢血漿中加入FⅫ激活劑和部分凝血活酶,啟動內(nèi)源醫(yī)學(xué).教育.網(wǎng).收集整理性凝血途徑,再加入活化的蛋白C(APC),由于APC可裂解FⅧa、FⅤa,使其滅活,導(dǎo)致APTT延長。如果受檢血漿APTT延長不明顯,提示患者存在活化蛋白C抵抗現(xiàn)象。通過比較加和未加APC的APTT比值的高低判斷APCR存在與否。
(2)參考范圍:APCR比值=APC-APTT(S)/APTT(S),>2.0。
?。?)臨床意義:FⅤ Leiden突變時,APCR陽性。
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