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病毒研究的發(fā)展常常與病毒培養(yǎng)和檢測方法的進步有密切的關(guān)系,特別在脊椎動物病毒方面,小鼠和雞胚接種、組織培養(yǎng)、超速離心、凝膠電泳、電子顯微鏡和免疫測定等技術(shù),對病毒學(xué)的發(fā)展具有深刻的影響。
噬菌體的培養(yǎng)和檢測方法最為簡單。將噬菌體接種到易感細菌的肉湯培養(yǎng)物中,經(jīng)18~24小時后,混濁的培養(yǎng)物重新透明,此時細菌被裂解,大量噬菌體被釋放到肉湯中,再經(jīng)除菌過濾,即為粗制噬菌體。為了測定其中噬菌體的數(shù)量,將粗制噬菌體稀釋到每一接種量含100個左右,與過量的細菌混合,然后鋪種于瓊脂平皿上,在溫箱中培養(yǎng)過夜,細菌繁殖成乳白色襯底,被噬菌體裂解的區(qū)域則在此襯底上表現(xiàn)為圓形的透明斑,稱為噬斑。噬斑數(shù)代表該接種量中有活力的噬菌體數(shù)量。如果挑出單個噬斑來培養(yǎng),就能獲得由單個噬菌體所繁殖的后代,達到分離純化的目的醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。
動物病毒(見脊椎動物病毒)的培養(yǎng)可在自然宿主、實驗動物、雞胚或細胞培養(yǎng)中進行,以死亡、發(fā)病或病變等作為病毒繁殖的直接指標,或以血細胞凝集、抗原測定等作為間接指標。收獲發(fā)病動物的組織磨成懸液或有病變的細胞培養(yǎng)液,即為粗制病毒。測定活病毒數(shù)量可采用空斑法,其原理與噬斑法相同,但以易感的動物單層細胞代替細菌,在接種適當(dāng)稀釋的病毒后,用含有培養(yǎng)液和中性紅的瓊脂覆蓋,使病毒感染局限在小面積內(nèi)形成病變區(qū),襯底的健康細胞被中性紅染成紅色,病變區(qū)不染色而顯示為空斑醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。
至今植物病毒的培養(yǎng)和檢測大都是在整株植物上進行的。從搗碎的病葉汁中制備病毒,常用枯斑法檢測。用手指蘸上混有金剛砂的稀釋病毒在植物葉片上軒輕摩擦,經(jīng)一定時間后出現(xiàn)單個分開的圓形壞死或退綠斑點,稱為枯斑。
除了利用病毒的致病性定量檢測病毒外,還可應(yīng)用物理方法,如在電子顯微鏡下計數(shù)病毒顆粒,或用紫外分光光度計測定提純病毒的蛋白和核酸量,這些方法所測得的數(shù)據(jù)包括了有感染性和無感染性的病毒粒。
應(yīng)用電子顯微鏡不但能看清病毒粒的大小、形態(tài),還可以分辨其表面的蛋白亞單位和內(nèi)部的核殼等超微結(jié)構(gòu)。