雙酶切反應(yīng)酶活性分析：

同步雙酶切是一種省時省力的常用方法。選擇能讓兩種酶同時作用的最佳緩沖液是非常重要的一步。NEB每一種酶都隨酶提供相應(yīng)的最佳NEBuffer，以保證100%的酶活性。NEBuffer的組成及內(nèi)切酶在不同緩沖液中的活性見《內(nèi)切酶在不同緩沖液里的活性表》及每支酶的說明書。能在最大程度上保證兩種酶活性的緩沖液即可用于雙酶切。由于內(nèi)切酶在非最佳緩沖液條件下的切割速率會減緩，因此使用時可根據(jù)每種酶在非最優(yōu)緩沖液中的具體活性相應(yīng)調(diào)整酶量和反應(yīng)時間。

如果找不到一種可以同時適合兩種酶的緩沖液，就只能采用分步酶切。分步酶切應(yīng)從反應(yīng)要求鹽濃度低的酶開始，酶切完畢后再調(diào)整鹽濃度直至滿足第二種酶的要求，然后加入第二種酶完成雙酶切反應(yīng)醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。

使用配有特殊緩沖液的酶進行雙酶切也不復(fù)雜。在大多數(shù)情況下，采用標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的酶也能在這些特殊緩沖液中進行酶切。這保證了對緩沖液有特殊要求的酶也能良好工作。由于內(nèi)切酶在非最佳緩沖液中進行酶切反應(yīng)時，反應(yīng)速度會減緩，因此需要增加酶量或延長反應(yīng)時間。通過《內(nèi)切酶在不同緩沖液里的活性表》可查看第二種酶在特殊緩沖液相應(yīng)鹽濃度下的作用活性。