【鑒別】(1) 取該品,置顯微鏡下觀察:不規(guī)則分枝狀團塊無色,遇水合氯醛液溶化;菌絲無色或淡棕色,直徑4~6μm 。油管含黃色或棕黃色分泌物,草酸鈣簇晶直徑18~32μm,存在于薄壁細胞中,常排列成行,或一個細胞中含有數(shù)個簇晶。草酸鈣針晶細小,長10~32μm,不規(guī)則地充塞于薄壁細胞中。纖維束周圍薄壁細胞含草酸鈣方晶,形成晶纖維。種皮石細胞黃色或淡棕色,多破碎,完整者長多角形、長方形或形狀不規(guī)則,壁厚。
(2) 取該品6g,研細,加乙醚10ml,密塞,超聲處理15分鐘,濾過,濾液揮干,殘渣加丙酮1ml 使溶解,作為供試品溶液。另取當歸對照藥材0.2g,同法制成對照藥材溶液。再取丹皮酚對照品,加丙酮制成每1ml 含1mg 的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗,吸取上述三種溶液各5μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)已烷-醋酸乙酯(10:1)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm) 下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點;噴以5% 三氯化鐵乙醇溶液,供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點。
【檢查】 應符合丸劑項下有關的各項規(guī)定(附錄Ⅰ A)。
加味逍遙丸(大蜜丸) 口服:每次1丸,每日2次。 加味逍遙膠囊 每粒0.3克??诜好看?粒,每日2次。 加味逍遙顆粒(沖劑) 口服:每次2克,每日2次。 加味逍遙片 每片0.3克??诜好看?片,每日2次。 加味逍遙口服液 每支10毫升??诜好看?0毫升,每日2次。
1.探討美替拉酮阻斷下丘腦一垂體一腎上腺皮質(zhì)軸(hypothalamic-pituitary-adrenal cortex axis,HPAA)對慢性心理應激小鼠免疫器官和細胞免疫功能有無保護作用,以及加味逍遙丸調(diào)節(jié)慢性心理應激損傷的作用是否與下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸相關。 方法:將小鼠隨機分為生理鹽水對照組、加味逍遙丸對照組、美替拉酮對照組、美替拉酮合用加味逍遙丸對照組、生理鹽水應激組、加味逍遙丸應激組、美替拉酮應激組、美替拉酮合用加味逍遙丸應激組。其中對照組小鼠不予以應激刺激,應激組小鼠采用電刺激條件反射箱誘導建立慢性心理應激模型。檢測各組小鼠體質(zhì)量、血清糖皮質(zhì)激素水平、胸腺指數(shù)、胸腺細胞凋亡率、脾臟自然殺傷細胞活性及淋巴細胞轉(zhuǎn)化率,并觀察小鼠胸腺組織病理學改變。結(jié)果:各應激組與其相對應的非應激對照組比較,其胸腺指數(shù)明顯下降,自然殺傷細胞活性及淋巴細胞轉(zhuǎn)化率均明顯下降;同時,胸腺細胞凋亡率升高,胸腺組織病理損傷加重。美替拉酮及加味逍遙丸應激組與生理鹽水應激組比較,其血清糖皮質(zhì)激素含量明顯下降,自然殺傷細胞活性及脂多糖刺激的淋巴細胞轉(zhuǎn)化率明顯升高,胸腺組織病理損傷減輕。美替拉酮合用加味逍遙丸應激組與單純的美替拉酮或加味逍遙丸應激組各項指標比較,均無明顯差異。結(jié)論:阻斷HPAA對慢性心理應激小鼠的免疫系統(tǒng)有明顯的保護作用。加味逍遙丸對慢性心理應激小鼠的保護作用與美替拉酮阻斷HPAA的效應基本一致,兩者無疊加、協(xié)同效應。推測HPAA是加味逍遙丸抗應激損傷的作用靶點之一。
2.探討交感-腎上腺髓質(zhì)軸阻斷對心理應激小鼠免疫器官結(jié)構(gòu)和細胞免疫功能的影響及加味逍遙丸調(diào)節(jié)心理應激損傷的作用機理。 方法:利用電刺激心理應激箱誘發(fā)心理應激模型、六羥多巴胺阻斷外周交感神經(jīng)、加昧逍遙丸為平行對照研究中藥;槍測臟器指數(shù)、胸腺細胞凋亡率、NK細胞活性、淋巴細胞轉(zhuǎn)化率、胸腺病理等免疫學指標。結(jié)果單純應激組較單純對照組小鼠胸腺指數(shù)下降、脾指數(shù)下降[(0.41±0.13)vs(0.53±0.15);P〈0.05]、胸腺細胞凋亡率升高[(33.21±5.54)%vs(17.79±5.18)%;P〈0.01]、NK細胞活性下降[(22.1±14.1)%vs(35.5±10.3)%;P〈0.01]、淋巴細胞轉(zhuǎn)化率下降(P〈0.01);六羥多巴胺阻斷后應激組較單純應激組NK細胞活性增大[(31.9±14.7)vs(22.1±14.1);P〈0.05]、淋巴細胞轉(zhuǎn)化率升高[(6985±580)cpm vs(4810±598)cpm,ConA(0.5ug/ml);P〈0.01];灌胃加味逍遙丸后應激組較單純應激組臟器指數(shù)升高、胸腺細胞凋亡率下降[(20.37±4.56)%vs(33.21±5.54)%;P〈0.01];二者均能顯著降低血糖皮質(zhì)激素水平(P〈0.05)。結(jié)論阻斷外周交感神經(jīng)明顯保護心理應激小鼠的細胞免疫功能;加味逍遙丸通過減少胸腺細胞凋亡、防止胸腺和脾臟萎縮、降低血糖皮質(zhì)激素等方面發(fā)揮抗應激損傷作用,其發(fā)揮作用的途徑可能不是通過阻斷外周交感神經(jīng)實現(xiàn)的。
3.探討心理應激后小鼠腦區(qū)原癌基因(c—Fos、c—Jun)蛋白表達的規(guī)律及加味逍遙丸對該蛋白表達的調(diào)節(jié)作用。 方法 利用電刺激心理應激箱誘發(fā)小鼠心理應激動物模型,加味逍遙丸(2mg/g體重)灌胃給藥,免疫組化法檢測c-Fos、c-Jun蛋白,觀察不同腦區(qū)核團:海馬1—4區(qū)(hippocampusCA1—4)、杏仁中央核(central amygdaloid nucleus,CAN)、下丘腦室旁核(paraventricular nucleus,PVN)、下丘腦視上核(supraoptic nucleus,SON)的表達變化。結(jié)果 與正常組比較,應激1次后3h組、應激3次后3h組、應激5次后3h組各腦區(qū)c-Fos、c—Jun蛋白表達均增強(P〈0.01);與應激1次后3h組比較,應激1次后1h組和應激1次后6h組表達減弱(P〈0.05或P〈0.01);與不服藥組比較,服藥組應激3次后3h組和應激5次后3h組c—Fos、c—Jun蛋白表達均減弱(P〈0.05或P〈0.01)。結(jié)論 心理應激后1h c—Fos、c-Jun蛋白開始升高,3h達高峰,c—Fos蛋白6h已回落近正常水平,c—Jun蛋白6h仍維持在較高水平,多次應激后在同一高峰點未見表達減弱現(xiàn)象;加味逍遙丸對應激后c—Fos、c—Jun蛋白的高表達有明顯下調(diào)作用。
4.加味逍遙丸對小鼠應激狀態(tài)調(diào)節(jié)作用. 方法:本實驗采用自制小站臺水環(huán)境應激小白鼠,應激后灌胃加味逍遙丸,取不同應激時間應激組和給藥組小鼠,分別測定小鼠胸腺、脾的重量和指數(shù)、5-HT及血清糖皮質(zhì)激素.結(jié)果:隨應激時間的加長,小鼠胸腺的5-羥色胺、糖皮質(zhì)激素的含量逐漸升高,胸腺、脾指數(shù)逐漸下降.結(jié)論:加味逍遙丸可以有效地改善小鼠的心理應激變化。