方法名稱： 桂枝茯苓丸—苦杏仁苷的測(cè)定—高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測(cè)定桂枝茯苓丸中苦杏仁苷的含量。

本方法適用于中成藥桂枝茯苓丸。

方法原理： 供試品于具塞離心管中加入甲醇，超聲振蕩，恒溫水浴后離心，上清液稀釋后制成供試品溶液，濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)210nm處檢測(cè)苦杏仁苷的吸收值，計(jì)算出其含量。

試劑： 1.甲醇（色譜純）

2.乙腈（色譜純）

3.冰醋酸

儀器設(shè)備： 1儀器

1.1高效液相色譜儀

1.2色譜柱

Hypersil C18(4.6mm×250mm,5μm)

1.3紫外吸收檢測(cè)器

2色譜條件

2.1流動(dòng)相：甲醇 乙腈 水 冰醋酸 = 1 1 16 0.02

2.2檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm

2.3柱溫：40℃

2.4流速：0.8mL/min

試樣制備： 1.稱取供試品

精密稱取桂枝茯苓丸顆粒劑粉末0.2g。

2.對(duì)照品溶液的制備

精密稱取105℃下干燥2h的苦杏仁苷對(duì)照品36mg，于20mL量瓶中以甲醇溶解、定容，制得對(duì)照品儲(chǔ)備液。

3.標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.3，1，2.5，4，5mL置5mL量瓶中，甲醇稀釋、定容，作為繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4.供試品溶液的制備

將供試品置具蓋離心管中加入甲醇10mL，超聲振蕩(42kHz)15min，40℃恒溫水浴中，振蕩15min，離心(3500r·min-1)15min，上清液移至20mL量瓶中，再以甲醇洗滌殘?jiān)?次，洗液并入量瓶中，定容，搖勻，微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取上述各系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)210nm處測(cè)定苦杏仁苷的峰面積積分值，以苦杏仁苷的峰面積積分值對(duì)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.供試品溶液的測(cè)定

分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)210nm處測(cè)定苦杏仁苷的峰面積積分值，用外標(biāo)法計(jì)算出苦杏仁苷的含量。