方法名稱(chēng)： 環(huán)孢素原料藥－環(huán)孢素－高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測(cè)定環(huán)孢素原料藥中環(huán)孢素的含量。

本方法適用于環(huán)孢素原料藥。

方法原理： 供試品經(jīng)乙腈-水（1：1）混合溶液溶解并定量稀釋?zhuān)M(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)210nm處檢測(cè)環(huán)孢素的峰面積，計(jì)算出其含量。

試劑： 1. 乙腈

2. 叔丁基甲醚

3. 磷酸

儀器設(shè)備： 1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（柱前連接¢0.25mm×1000mm的不銹鋼管），理論塔板數(shù)按環(huán)孢素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：乙腈 水 叔丁基甲醚 磷酸=430 520 50 1

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm

2.3 柱溫：70℃

試樣制備： 1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取環(huán)孢素對(duì)照品適量，用乙腈-水（1：1）混合溶液溶解并定量稀釋成每1mL中約含環(huán)孢素1.25mg的溶液，即為對(duì)照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

精密稱(chēng)取供試品適量，用乙腈-水（1：1）混合溶液溶解并定量稀釋成每1mL中約含環(huán)孢素1.25mg的溶液，即為供試品溶液。

注：“精密稱(chēng)取”系指稱(chēng)取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱(chēng)取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器于波長(zhǎng)210nm處測(cè)定環(huán)孢素（C62H111N11O12）的峰面積，計(jì)算出其含量。