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阿法骨化醇含量測定

2012-08-14 20:45 醫(yī)學教育網
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照高效液相色譜法(附錄Ⅴ D)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用硅膠為填充劑;以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯-三氯甲烷(44:42:14)為流動相;檢測波長為265nm。取本品適量,用流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液,取上述溶液于太陽光或鎢燈光下照射0.5小時后,產生一定量反式阿法骨化醇,精密量取20μl注入液相色譜儀,反式阿法骨化醇峰對阿法骨化醇峰的相對保留時間約為0.92,阿法骨化醇峰與反式阿法骨化醇峰的分離度應符合要求;另取上述溶液2ml,于80℃水浴加熱回流2小時,放冷,產生一定量前阿法骨化醇,精密量取20μl注入液相色譜儀,前阿法骨化醇峰對阿法骨化醇峰的相對保留時間約為1.3,阿法骨化醇峰與前阿法骨化醇峰的分離度應符合要求。理論板數按阿法骨化醇峰計算不低于2000。

測定法 取本品適量,精密稱定,用流動相溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1μg的溶液,精密量取20μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另取阿法骨化醇對照品適量,精密稱定,同法測定,按外標法以峰面積計算,即得。

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