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基因工程基本原理-口腔執(zhí)業(yè)助理醫(yī)師輔導資料

口腔助理醫(yī)師考試中的科目繁多,醫(yī)學教育網小編整理了考試中的部分內容,希望對參加考試的考生有所幫助。

基因工程基本原理:一個完整的基因克隆過程應包括:目的基因的獲取,克隆基因載體的選擇與改造,目的基因與載體的連接,重組DNA分子導入受體細胞,篩選出含感興趣基因的重組DNA轉化細胞。實現(xiàn)上述過程需要一些重要的工具酶,如限制性內切核酸酶連接酶等。限制性內切核酸酶是一類識別DNA特意序列的內切核酸酶。

①目的基因的獲?。和庠椿蛴址Q目的基因,來源于幾種途徑:化學合成、酶促合成cDNA,制備的基因組DNA及PCR技術。細菌質粒、噬菌體和一些病毒DNA均可被改造成基因克隆的載體。

②基因載體的選擇與構建:可作為基因載體的DNA分子有質粒DNA、噬菌體DNA和病毒DNA,它們經適當改造后仍具有自我復制能力,或兼有表達外源基因的能力。

③外源基因與載體的連接:連接方式有:黏性末端連接、平端連接和人工接頭連接等。

④重組DNA導入宿主細胞:外源DNA與載體在體外連接成重組DNA分子,需將其導入宿主細胞。隨受體細胞生長、增殖,重組DNA分子得以復制、擴增。

⑤重組體的篩選:鑒定哪一菌落或嗜菌斑所含重組DNA分子確實帶有目的基因,即可得到目的基因的克隆,這一過程即為篩選或選擇。

⑥克隆基因的表達:在原核或真核表達體系中進行表達,獲得所需要的蛋白質。

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