免疫遺傳學(xué)研究的發(fā)展，很大程度上依賴于以分型為主要手段的HLA多態(tài)性分析。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)的小編整理了HLA的三種分型技術(shù)，希望對考生有所幫助。

1.血清學(xué)分型技術(shù)：

1）HLA-Ⅰ類抗原的檢測

HLA-A、B、C抗原型別鑒定均借助微量淋巴細胞毒試驗或稱補體依賴的細胞毒試驗。原理為取已知HLA抗血清加入待測外周血淋巴細胞，作用后加入免補體，充分作用后加入染料，在倒置顯微鏡下判斷結(jié)果，著染的細胞為死亡細胞，表示待檢淋巴細胞表面具有已知抗血清所針對的抗原。標準抗原清取自多次經(jīng)產(chǎn)婦或計劃免疫志愿者。

2）HLA-DR、DQ抗原檢測

該二抗原分型方法與HLA-Ⅰ類抗原相同，但所用抗血清須經(jīng)過血小板吸收以去除針對Ⅰ類抗原的抗體。另外，待測細胞須是經(jīng)純化的B細胞。

2.細胞學(xué)分型技術(shù)：

HLA-Dw特異性與HLA-DP特異性可分別通過純合分型細胞及預(yù)致敏淋巴細胞試驗檢測。二種方法的基本原理均是判斷淋巴細胞在識別非已HLA抗原決定簇后發(fā)生的增殖反應(yīng)。由于分型細胞來源困難以及操作手續(xù)繁瑣，細胞學(xué)分型技術(shù)下正逐漸淘汰。

3.HLA的DNA分型技術(shù)

1）限制性片段長度多態(tài)性檢測技術(shù)

這是首先建立的對多態(tài)性進行檢測的DNA分析技術(shù)。個體間抗原特異性來自氨基酸順序的差別，后者由編碼基因的堿基順序不同所決定。這種堿基順序的差別造成限制性內(nèi)切酶識位置及酶切位點數(shù)目的不同，從而產(chǎn)生數(shù)量和長度不一的DNA酶切片段。用特異性探針對整個基因組DNA酶切片段進行雜交，即可分析限制性長度片段多態(tài)性。一定的內(nèi)切酶組合所得到的HLA-RFLP可以和傳統(tǒng)方法測定的HLA特異性型別相關(guān)。80年代末發(fā)展起來的PCR技術(shù)已被用于RFLP分析，即用等位特異限制酶裂解PCR擴增的片段，然后再進行分析，從而大提高了靈敏度。

2）PCR/SSO技術(shù)

此法乃用人工合成的HLA型別特異的寡核苷酸序列作為探針，與待檢細胞經(jīng)PCR擴增的HLA基因片段雜交，從而確定HLA型別，PCR技術(shù)可將HLA復(fù)合體上指定基因片段特異性地擴增5～6個數(shù)量級；而專門設(shè)計的SSO探針又能探測出等位基因間1～2個核苷酸的差異，故PCR/SSO技術(shù)具有靈敏度、特異性強、需樣本量少等優(yōu)點。

3）PCR/SSP技術(shù)

目前常規(guī)的HLA-DNA分型技術(shù)，包括上述的PCR/RFLP、PCR/SSO等，最終均需用標記的特性探針與擴增產(chǎn)物進行雜交，再分析結(jié)果。PCR/SSP方法用乃設(shè)計出一整套等位基因組特異性引物，借助PCR技術(shù)獲得HLA型別特異的擴增產(chǎn)物，可通過電泳直接分析帶型決定HLA型別，從而大大簡化了實驗步驟。

由于傳統(tǒng)方法在Ⅱ類抗原分型方面困難較大，故上述幾種基因分析型方法目前主要用于Ⅱ類基因座。此外，目前已建立的HLA基因分型技術(shù)還包括PCR單鏈構(gòu)像多態(tài)性分析和PCR 異源二聚體電泳多態(tài)即PCR指紋圖分析。DNA分型技術(shù)的應(yīng)用，使HLA型別分析達到了更精細的水平，并因此發(fā)現(xiàn)了更多的HLA多態(tài)性。HLA的DNA分型技術(shù)現(xiàn)已成為血清學(xué)方法的競爭者，并可能在不久的將來完全取而代之。