營養(yǎng)要求比一般細菌高，除基礎營養(yǎng)物質(zhì)外還需加入10～20%人或動物血清以提供支原體所需的膽固醇。最適pH7.8～8.0之間，低于7.0則死亡，但解脲支原體最適pH6.0～6.5。

大多數(shù)兼性厭氧，有些菌株在初分離時加入5%CO₂生長更好醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理。生長緩慢，在瓊脂含量較少的固體培養(yǎng)基上孵育2～3天出現(xiàn)典型的“荷包蛋樣”菌落：圓形（直徑10～16um），核心部分較厚，向下長入培養(yǎng)基，周邊為一層薄的透明顆粒區(qū)。此外，支原體還能在雞胚絨毛尿囊膜或培養(yǎng)細胞中生長。