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細(xì)胞培養(yǎng)液的構(gòu)成

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  細(xì)胞培養(yǎng)液指細(xì)胞生長的液體環(huán)境,一般指完全培養(yǎng)液,添加了血清、水解乳蛋白、各種添加劑等可以直接使用的培養(yǎng)液。

  1.細(xì)胞培養(yǎng)基&血清模式

  血清對于在傳統(tǒng)培養(yǎng)基配方中生長和增殖的大多數(shù)細(xì)胞系來說是需要的,因?yàn)榇蠖鄶?shù)單獨(dú)的培養(yǎng)基并不能提供細(xì)胞生長所需要的全部營養(yǎng),如MEM培養(yǎng)基,較為常用的量為5%~10%的比例,而特殊的低血清培養(yǎng)基血清量可降至3%左右,細(xì)胞的形態(tài)和功能不受影響。

  注:SLM120為清大天一公司低血清培養(yǎng)基,上圖為培養(yǎng)24小時細(xì)胞密度,下圖為48小時細(xì)胞密度。

  血清可在培養(yǎng)基滅菌后加入,也可與培養(yǎng)基混合后一起過濾。血清的添加一方面補(bǔ)充了細(xì)胞生長、增殖所需的一些因子(如生長因子等),另一方面也增加了培養(yǎng)基的黏滯度,這樣可以降低細(xì)胞在懸浮培養(yǎng)中或被胰蛋白酶消化后的損傷。

  但是血清的加入也帶來了很多問題,血清都是批量生產(chǎn),各批之間差異很大,血清含一些對細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶、補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌毒素等都會影響細(xì)胞生長,甚至造成細(xì)胞死亡。血清的使用使得實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化困難,其中的蛋白質(zhì)使得某些轉(zhuǎn)基因蛋白生物藥品生產(chǎn)中分離純化工作很難完成。血清質(zhì)量問題還會對接種病毒以及毒價產(chǎn)生影響,例產(chǎn)毒少,毒價低。

  2.細(xì)胞培養(yǎng)基&乳歐液模式

  化學(xué)合成培養(yǎng)基現(xiàn)雖已大規(guī)模使用,但在某些培養(yǎng)領(lǐng)域水解乳蛋白仍在使用,以補(bǔ)充培養(yǎng)液中缺乏的氨基酸、小肽物質(zhì)。較為常用的方式是用漢氏或歐式平衡鹽溶液溶解水解乳蛋白(一般為5‰濃度),即成乳漢(歐)液,再與化學(xué)合成培養(yǎng)基(一般為MEM)按比例混合使用(如1:1)。

  水解乳蛋白為乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物,含有豐富的氨基酸。既可用于細(xì)菌微生物培養(yǎng),又可用于動物細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)中一般為0.5%水解乳蛋白(經(jīng)平衡鹽溶解)與合成培養(yǎng)基(如MEM)按1:1混合使用。目前在生產(chǎn)中主要用于地鼠腎細(xì)胞等細(xì)胞的培養(yǎng)和維持。但是水解乳蛋白的使用也給生物制品的生產(chǎn)帶來一定的風(fēng)險。首先由于水解乳蛋白來源于動物,有可能攜帶傳染源,包括病毒和有毒物質(zhì)。任何一種傳染源都可能對正在生長的細(xì)胞系或者制品帶來風(fēng)險。其次水解乳蛋白及含有動物組分培養(yǎng)基的使用,使生物制品下游處理變得復(fù)雜,這對于蛋白質(zhì)藥物顯得更加重要。因?yàn)橛脛游锛?xì)胞生產(chǎn)生物藥品,其面臨的最大困難就是如何去除內(nèi)源或同源蛋白。不確定的成分,例如動物肽類物質(zhì)的引入,勢必會增加提取、分離、純化步驟,一方面使成本提高,另一方面也會影響生物制品的產(chǎn)量和質(zhì)量。

  3.細(xì)胞培養(yǎng)基&各類添加劑(生長因子等)模式

  成分復(fù)雜的培養(yǎng)基還含有許多化合物,包括蛋白質(zhì)、多肽、核苷、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物、丙酮酸及脂類等。已發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的血清濃度減少時,這些成分都是必需的。既使在使用血清的情況下,這些成分也可幫助細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)及維持某些特殊細(xì)胞系的生長。

  激素和生長因子在大多數(shù)常規(guī)培養(yǎng)基的配方中都沒有注明,但在無血清培養(yǎng)基中通常要加入它們,用其來代替血清中的激素(包括50ng/ml的生長激素和1~10U/ml的胰島素),它們能增加多種不同類型細(xì)胞的貼瓶率;氫化可的松能提高膠質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的克隆形成率。生長因子包括FGF家族、EGF、PDGF、IGF-1和IGF-2及白介素等,生長因子和細(xì)胞因子有著廣泛的特異性,醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)搜集整理一般與激素或其它物質(zhì)起相互協(xié)同或加成作用。

  另一種常見的添加物就是血清替代物,目前已有許多可完全或部分替代傳統(tǒng)培養(yǎng)液中血清成分的商業(yè)產(chǎn)品,其穩(wěn)定性較好,但批次間仍有差別,產(chǎn)品的成分也不很確定。

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