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　　微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析

　　該免疫分析技術(shù)有兩種方法：

　　一種是小分子抗原物質(zhì)的測(cè)定采用競(jìng)爭(zhēng)法。另一種是大分子的抗原物質(zhì)測(cè)定采用雙抗體夾心法。該儀器所用固相磁粉顆粒極微小，其直徑僅1.0μm，這樣大大增加了包被表面積，增加抗原或抗體的吸附量，使反應(yīng)速度加快，也使清洗和分離更簡(jiǎn)便，從而減少污染，降低交叉污染概率。反應(yīng)中使用堿性磷酸酶（ALP）標(biāo)記抗原或抗體，作用于其底物二氧乙烷磷酸酯，由其在激發(fā)態(tài)與基態(tài)的動(dòng)力學(xué)變化中發(fā)生發(fā)光反應(yīng)。

　　1.競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)

　　其原理是：

　　用過量包被磁顆粒的抗體，與待測(cè)的抗原和定量的標(biāo)記吖啶酯抗原同時(shí)加入反應(yīng)杯溫育，其免疫反應(yīng)的結(jié)合形式有兩種，一是標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合成復(fù)合物；二是測(cè)定抗原與抗體的結(jié)合形式。如受檢標(biāo)本中含有待測(cè)抗原，則與標(biāo)記抗原以同樣的機(jī)會(huì)與磁顆粒包被的抗體結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)性地占去了吖啶酯標(biāo)記抗原與磁顆粒包被的抗體結(jié)合的機(jī)會(huì)，使吖啶酯標(biāo)記抗原與磁顆粒包被的抗體的結(jié)合量減少。由于磁顆粒包被的抗體是過量的，足以與待測(cè)抗原結(jié)合。

　　2.雙抗體夾心法：

　　其原理是：

　　標(biāo)記抗體與被測(cè)抗原同時(shí)與包被抗體結(jié)合成一種反應(yīng)形式，即包被抗體-測(cè)定抗原-發(fā)光抗體的復(fù)合物。具體講是以順磁性微珠作為載體包被抗體，利用磁性微珠能被磁場(chǎng)吸引，在磁場(chǎng)的作用下發(fā)生力學(xué)移動(dòng)的特性，迅速捕捉到被測(cè)抗原，當(dāng)加入標(biāo)本后，標(biāo)本中的抗原與磁性抗體形成復(fù)合物，在磁力的作用下，協(xié)助該復(fù)合物快速地與其他非特異性物質(zhì)分離，使抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的時(shí)間縮短，測(cè)定時(shí)間減少，降低了交叉污染的幾率，此時(shí)再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的第二抗體，形成磁珠包被抗體-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，經(jīng)洗滌去掉未結(jié)合的抗體后，加入ALP的發(fā)光底物環(huán)1，2-二氧乙烷衍生物AMPPD .

　　AMPPD被復(fù)合物上ALP催化，迅速地去磷酸基團(tuán)，生成不穩(wěn)定的中間體AMPD . AMPD的快速分解，從高能激發(fā)態(tài)回到低能量的穩(wěn)定態(tài)時(shí)，持續(xù)穩(wěn)定地發(fā)射出光子（hv），發(fā)射光所釋放的光子能量被光量子閱讀系統(tǒng)記錄，通過計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)將光能量強(qiáng)度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上轉(zhuǎn)換為待測(cè)抗原的濃度，并報(bào)告結(jié)果。其檢測(cè)水平可達(dá)pg/ml水平，重復(fù)性好。

　　代表系統(tǒng)：美國(guó)BECHMAN公司的ACCESS全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)。