細(xì)胞化學(xué)是組織學(xué)的一個(gè)分支，是在細(xì)胞形態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)上研究細(xì)胞的生物化學(xué)成分，及其定位、定量及代謝功能狀態(tài)的學(xué)科。在細(xì)胞形態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)上，運(yùn)用化學(xué)反應(yīng)的原理對血細(xì)胞內(nèi)的各種生化組成及其代謝產(chǎn)物（酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。

　　細(xì)胞化學(xué)染色臨床上主要用于：①輔助判斷白血病的細(xì)胞類型。白血病的診斷以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，但有時(shí)僅采用瑞式染色是難以判斷白血病細(xì)胞的類型的。不同的細(xì)胞系列，其所含的化學(xué)物質(zhì)成分、含量及分布各不相同，隨著細(xì)胞的分化階段及病理生理狀態(tài)變化，這些物質(zhì)的含量也會(huì)發(fā)生相應(yīng)改變。因此根據(jù)細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果的不同，可推斷細(xì)胞的所屬系列。因此臨床上細(xì)胞化學(xué)染色成為輔助診斷白血病必要的、醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理有力的手段。②其他血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷。在病理情況下，血細(xì)胞的化學(xué)物質(zhì)的成分及含量會(huì)發(fā)生改變，據(jù)此可以輔助疾病的鑒別診斷。如中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色、鐵染色等。③觀察疾病的療效和預(yù)后。當(dāng)病理狀況糾正后，血細(xì)胞的化學(xué)物質(zhì)的成分及含量會(huì)發(fā)生改變。④發(fā)病機(jī)制的研究。

　　細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟為固定、顯示及復(fù)染。不同的細(xì)胞化學(xué)染色，步驟不同。

　　1、固定：為了保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分的不變，需要對細(xì)胞進(jìn)行固定。根據(jù)染色的成分不同，選擇合適的固定液，使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、酶類、糖等變成不溶性物質(zhì)。固定的方法有物理法和化學(xué)法，臨床常用化學(xué)法固定。物理法包括干燥和火焰固定，化學(xué)法包括甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定。采用蒸氣或液體固定。

　?。?）蒸氣固定：甲醛是常用的固定劑，極易揮發(fā)、氧化，常用40%甲醛蒸氣固定。方法為在封閉的玻璃器皿中加入40%甲醛，將涂片血膜朝下，固定5～10分鐘。

　?。?）液體固定：將涂片浸在甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定液中，也可將兩種或兩種以上固定液混合，如10%甲醛甲醇液，甲醛丙酮液等。

　　2、顯示：通過不同的化學(xué)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的有色沉淀，顯示出被檢測的化學(xué)物質(zhì)。常用的化學(xué)反應(yīng)種類有以下幾種：

　?。?）偶氮偶聯(lián)法：含萘酚的底物，在相應(yīng)酶的作用下釋放出萘酚，后者與重氮鹽結(jié)合，偶氮偶聯(lián)形成有色沉淀。重氮鹽的種類有堅(jiān)牢藍(lán)紫醬GBC、堅(jiān)牢藍(lán)B、六氮偶付品紅等。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色、特異性酯酶染色、非特異性酯酶染色、酸性磷酸酶染色等。

　?。?）聯(lián)苯胺法：過氧化物酶染色采用此法。粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中的過氧化物酶（主要是髓過氧化物酶），能分解過氧化氫釋放出新生態(tài)氧，使無色的聯(lián)苯胺氧化形成有色沉淀。

　　（3）普魯士藍(lán)反應(yīng)：細(xì)胞內(nèi)外的鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用，形成亞鐵氰化鉀藍(lán)色沉淀，如鐵染色。

　　（4）雪夫反應(yīng)：過碘酸氧化細(xì)胞內(nèi)糖類中的乙二醇基形成乙二醛基，醛基與雪夫試劑作用，使無色品紅形成紅色沉淀物，如過碘酸－雪夫反應(yīng)。

　?。?）金屬沉淀法：某些金屬化合物有顏色，形成沉淀后可以顯示相應(yīng)的物質(zhì)，如鈣－鈷法中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色。

　　3、復(fù)染：顯色反應(yīng)只是針對細(xì)胞中的特定物質(zhì)，要顯現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)還需要用其他染液對細(xì)胞進(jìn)行復(fù)染。所選擇的復(fù)染液染色的結(jié)果應(yīng)使細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，且應(yīng)與有色沉淀有明顯的對比度。對細(xì)胞核著色效果較好的有中性紅、甲基綠、蘇木精、核固紅、沙黃等，使?jié){著色較好的有伊紅、剛果紅、光綠等。

　　復(fù)染后首先觀察正常應(yīng)為強(qiáng)陽性的細(xì)胞，如過氧化物酶染色觀察中性粒細(xì)胞是否強(qiáng)陽性，如該類細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，對比度良好，說明染色成功，可進(jìn)一步觀察計(jì)數(shù)其他細(xì)胞的染色情況醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。

　　影響細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果的因素眾多，主要有：標(biāo)本的制備和保存方式；固定目的和固定劑的選擇；酶作用底物的特異性及其選擇、酶反應(yīng)的最適時(shí)間、溫度和PH值；抑制物如NaF、酒石酸和活化劑如鈣離子、鎂離子的選擇和控制；儲(chǔ)備液和緩沖劑的制備及保存方法；陽性率和半定量積分的計(jì)算方法。每一步都必須力求精準(zhǔn)，方能獲得可信的結(jié)果。

　　細(xì)胞化學(xué)染色方法眾多，常用的有過氧化物酶染色、蘇丹黑B染色、酯酶染色、過碘酸－雪夫染色、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色、酸性磷酸酶和抗酒酸酸性磷酸酶染色、骨髓鐵染色等。目前還發(fā)展了上述染色法在同一張標(biāo)本上的雙染色，可提高分型的準(zhǔn)確率。下面介紹這幾種染色法的原理和臨床意義。