【摘要】 目的 探討影響血液細(xì)胞分析儀測(cè)定血小板（PLT）的因素，排除假性增高和假性降低情況，及時(shí)準(zhǔn)確地為臨床提供可靠的診治依據(jù)。 方法 使用血液細(xì)胞分析儀（Sysmex Kx-21）及目視顯微鏡法同時(shí)對(duì)160余例血小板數(shù)與直方圖不符標(biāo)本進(jìn)行計(jì)數(shù)，對(duì)比分析。 結(jié)果 血小板聚集、小紅細(xì)胞數(shù)量、試劑的質(zhì)量、抗凝劑的種類及比例、標(biāo)本放置時(shí)間和反復(fù)混勻次數(shù)、血小板體積異常等均可影響血細(xì)胞分析儀準(zhǔn)確計(jì)數(shù)PLT. 結(jié)論 血液細(xì)胞分析儀并不能完全代替顯微鏡計(jì)數(shù)，對(duì)PLT計(jì)數(shù)與直方圖不符標(biāo)本，應(yīng)分析原因，用顯微鏡計(jì)數(shù)或重新采血。

　　【關(guān)鍵詞】 血液細(xì)胞分析儀；血小板；直方圖

　　血小板（PLT）檢測(cè)是研究止血與凝血障礙的重要指標(biāo)之一，也是其他血小板參數(shù)可靠性的基礎(chǔ)，其檢測(cè)結(jié)果的可靠性至關(guān)重要。血小板由于體積小，特別是容易發(fā)生粘附、聚集和變性破壞，故常難以準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。血液細(xì)胞分析儀的普及，大大提高了工作效率，但對(duì)血小板檢測(cè)，其結(jié)果往往不很穩(wěn)定。使用血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血小板的影響因素很多，現(xiàn)探討如下。

　　1 材料與方法

　　1.1 儀器

　　血液細(xì)胞分析儀（Sysmex Kx-21），為日本Sysmex公司產(chǎn)品。

　　1.2 試劑

　　全部配套試劑和質(zhì)控液。

　　1.3 檢測(cè)方法

　　對(duì)日常標(biāo)本進(jìn)行分析，并對(duì)其中160余例血小板數(shù)量與直方圖不符標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行目視顯微鏡計(jì)數(shù)。

　　2 結(jié)果

　　2.1 正常與異常圖形PLT鏡檢結(jié)果

　　見表1.從表1中可以看出，正常圖形的標(biāo)本，兩種方法檢測(cè)血小板的結(jié)果，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上，差異無顯著性。而異常圖形的標(biāo)本，兩種方法檢測(cè)血小板的結(jié)果，差異有顯著性。表1（略）

　　2.2 不同MCV值血細(xì)胞分析儀與鏡檢法PLT結(jié)果比較

　　見表2.在MCV＞70fl時(shí)，血細(xì)胞分析儀法與顯微鏡法相比，差異無顯著性。在MCV＜70fl時(shí)，血細(xì)胞分析儀法與顯微鏡法相比差異有顯著性。表2 不同MCV值血細(xì)胞分析儀與鏡檢法PLT結(jié)果的比較（略）

　　3 討論

　　采血過程中因操作緩慢、穿刺不順、組織液混入，混勻不及時(shí)等均可促成血小板（PLT）聚集，導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏低。在PLT直方圖上提示有大顆粒存在，PLT聚集是影響PLT計(jì)數(shù)的主要原因。對(duì)此種情況進(jìn)行了顯微鏡鏡檢，并與正常圖形進(jìn)行對(duì)比，由表1可看出，此種異常圖形的出現(xiàn)，絕大部分是由PLT聚集所引起，結(jié)果極不可靠，須重新采血。

　　由于血小板（PLT）和紅細(xì)胞（RBC）是在同一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)中通過顆粒大小來加以鑒別的，大量小紅細(xì)胞的存在可引起PLT上限區(qū)域的改變。在平均紅細(xì)胞容積（MCV）大于70fl時(shí)，儀器一般無PLT上限區(qū)域干擾報(bào)警，血細(xì)胞分析儀法與顯微鏡法相比，差異無顯著性。在MCV小于70fl時(shí)，儀器往往提示上限區(qū)域有干擾，紅細(xì)胞直方圖上顯示有小紅細(xì)胞存在，如表2所示。研究發(fā)現(xiàn)，MCV值越小，小紅細(xì)胞數(shù)量越多，被記錄的PLT數(shù)就越多，血小板計(jì)數(shù)值就越高，儀器法與鏡檢法相比差異越顯著。此種現(xiàn)象可用流式細(xì)胞技術(shù)或二維激光散射技術(shù)避免［1］。實(shí)際工作中采用手工法亦可獲得可靠的血小板計(jì)數(shù)值。

　　血細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果，尤其是血小板（PLT）的結(jié)果，直接反映試劑的質(zhì)量。原則上強(qiáng)調(diào)使用與儀器檢測(cè)原理相匹配的試劑［2］。溶血?jiǎng)┦茄?xì)胞分析儀試劑中的主要試劑，能將紅細(xì)胞溶解，并能使白細(xì)胞的體積發(fā)生規(guī)律性變化。理論上講PLT計(jì)數(shù)時(shí)的脈沖大小只與稀釋液的性能和儀器的設(shè)置有關(guān)，與溶血?jiǎng)┑男阅軣o關(guān)。但實(shí)際工作發(fā)現(xiàn)，若溶血不完全，由于紅細(xì)胞碎片沖洗不徹底將引起PLT假性增高。此外，稀釋液的滲透壓、離子強(qiáng)度等亦可影響檢測(cè)結(jié)果。特別注意的事，試劑應(yīng)避免污染，否則，雜質(zhì)微粒會(huì)使本底增高，導(dǎo)致最后計(jì)數(shù)結(jié)果偏高。

　　抗凝劑的種類對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較大，國際化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）推薦用EDTA二鉀抗凝。另外，血液和抗凝劑比例也會(huì)影響檢測(cè)質(zhì)量。血液比例過高時(shí)，由于抗凝劑相對(duì)不足，血漿中出現(xiàn)微血塊的可能性增加。微凝塊可能堵塞儀器影響檢測(cè)結(jié)果。如果血少，抗凝劑的濃度增高，血小板會(huì)腫脹、崩解、產(chǎn)生正常PLT大小的碎片，從而無法得出正確的結(jié)果［3］.

　　齊天蕊等［4］的研究表明，標(biāo)本放置時(shí)間太長(zhǎng)，易產(chǎn)生巨大血小板，這種巨大血小板分布于紅細(xì)胞直方圖的100～250fl處，引起血小板計(jì)數(shù)偏低，平均紅細(xì)胞容積偏高。此外，全血標(biāo)本需不斷混勻，2h內(nèi)完成測(cè)定。

　　在正常情況下，血細(xì)胞分析儀對(duì)血細(xì)胞體積的識(shí)別有明顯的體積界限：PLT2～30fl.根據(jù)Coulter原理，儀器只識(shí)別顆粒大小而不能識(shí)別顆粒的性質(zhì)。當(dāng)其體積異常超過該儀器設(shè)定的閾值，往往會(huì)造成誤判。從表1來看，大PLT引起儀器計(jì)數(shù)結(jié)果偏低。一般來說，PLT體積異常小的情況極少見，故不作討論。

　　此外，在血小板（PLT）體積分布圖上，2～3fl粒子過高時(shí)，圖形左移甚至縮窄呈“尖峰”樣，此種情況除血小板體積偏小外，常有紅細(xì)胞碎片、冷凝球蛋白、紅細(xì)胞夾雜物等引起，一起致計(jì)數(shù)結(jié)果增高［5］。有報(bào)道認(rèn)為，白血病細(xì)胞、皮下脂肪滴污染及標(biāo)本的細(xì)菌污染等，亦能引起PLT測(cè)定值偏高，有待進(jìn)一步探討。由此可見，PLT計(jì)數(shù)是否準(zhǔn)確，應(yīng)結(jié)合直方圖進(jìn)行判斷，必要時(shí)進(jìn)行顯微鏡計(jì)數(shù)或重新采血。

　　【參考文獻(xiàn)】

　　1 朱忠勇.準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板方法學(xué)研究進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)，2002，23（3）：131-132.

　　2 朱蕓.不同血液分析儀試劑使用的比較.河北醫(yī)藥，2000，22（11）：854-855.

　　3 劉健.抗凝劑對(duì)血小板及其參數(shù)檢測(cè)結(jié)果的影響分析.國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2004；10（8）：64-65.

　　4 齊天蕊.血小板計(jì)數(shù)誤差與標(biāo)本放置時(shí)間關(guān)系的探討.醫(yī)學(xué)文選，2003，22（4）：532.

　　5 李興武.全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)血小板影響因素分析及糾正.中國誤診學(xué)雜志，2002，2（3）：387-389.