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血涂片制備與染色

2013-12-18 11:10 來(lái)源:
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血涂片是通過特定的方法將血液按一定方向均勻涂開的過程,微觀上使細(xì)胞是由球形變?yōu)槠矫嫘位蚪矫嫘纹戒佋谳d玻片上。血涂片的顯微鏡檢查是血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的基本步驟,特別是對(duì)于各種血液病的診斷和鑒別診斷,具有重要價(jià)值。血涂片制備是否合格、染色的好壞直接關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量。

(一)血涂片制備

1.載玻片的準(zhǔn)備

新載玻片常帶有游離堿質(zhì),須用濃度為lmol/L的HCl浸泡24h,再用清水徹底沖洗,干燥后備用。舊載玻片要用含洗滌劑的清水中煮沸20min,洗掉血膜,再用清水反復(fù)沖洗,最后用0.95L/L乙醇浸泡1h,干燥備用。

使用載玻片時(shí),不要用手觸及玻片表面,保持玻片清潔、干燥、中性、無(wú)油膩。

2.血涂片制作方法

取血液標(biāo)本一滴置載玻片的一端,以邊緣平滑的推片一端,從血滴前沿方向接觸血液,使血液沿推片散開,推片與載玻片保持30~45○夾角,平穩(wěn)地向前推動(dòng),血液即在載玻片上形成薄層血膜。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)

涂片的厚薄與血滴大小、推片與載玻片之間的角度、推片時(shí)的速度及血細(xì)胞比容有關(guān)。血滴大、角度大、速度快則血膜越厚;反之則血膜越薄。

一張良好的血涂片,要求厚薄適宜,頭體尾明顯,細(xì)胞分布均勻,血膜邊緣整齊并留有的空隙。

(二)血涂片染色

染色的目的是使細(xì)胞的主要結(jié)構(gòu),如細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等染上不同的顏色,以便于鏡下觀察識(shí)別。

血涂片染色包括兩個(gè)過程:固定和染色。固定是將細(xì)胞蛋白質(zhì)和多糖等成分迅速交聯(lián)凝固,以保持細(xì)胞原有形態(tài)結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化。常用的染色方法有瑞特染色法(Wright)、姬姆薩染色法(Giemsa)等。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)

1.瑞特(Wright)染色法

本法的特點(diǎn)是將固定和染色合并在一起進(jìn)行,手續(xù)簡(jiǎn)便,染色時(shí)間短,對(duì)白細(xì)胞特異性顆粒著色較好,但對(duì)核的著色略差。

2.姬姆薩(Giemsa)染色法姬姆薩染料由天青和酸性染料伊紅組成的復(fù)合染料。染色原理、緩沖液與瑞特染色法大致相同。本法對(duì)細(xì)胞核結(jié)構(gòu)和寄生蟲著色較好,結(jié)構(gòu)顯示更為清晰,但細(xì)胞質(zhì)和顆粒著色較差。

3.瑞-姬染色法

瑞特染色液和姬姆薩染色液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)有各自的顯色特征,前者對(duì)細(xì)胞漿和顆粒著色較好,后者對(duì)對(duì)細(xì)胞核結(jié)構(gòu)顯示清晰。因此將瑞特染料和姬姆薩染料混合,甲醇溶解后組成瑞-姬染色液能取長(zhǎng)補(bǔ)短,優(yōu)勢(shì)互補(bǔ),其中所使用的緩沖液與瑞特染色法相同。用該混合染液對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行染色,細(xì)胞核、細(xì)胞漿和細(xì)胞內(nèi)顆粒著色均有上佳表現(xiàn),著色鮮艷,對(duì)比鮮明,是臨床上廣泛使用的方法。

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