標本采集

包括痰、膿液、血液、腦脊液等標本。

涂片染色鏡檢

革蘭氏色染色呈陽性球菌，呈矛頭狀成雙排列，坦面相鄰，尖端向外。若標本可見大量炎性細胞同時存在時有重要的參考價值。

莢膜染色

陽性。

分離培養(yǎng)

常采用羊血平板，有助于其溶血特征的識別和進一步鑒定，而且初代分離應置5%~10%CO2的環(huán)境下培養(yǎng)。在血平板上，肺炎鏈球菌的菌落直徑0.5~1.5mm,灰白色、半透明、表面光滑（有些菌株可表現(xiàn)為粘液狀）扁平，周圍環(huán)繞著草綠色溶血環(huán)。培養(yǎng)或放置24h以上的培養(yǎng)物還會由于肺炎鏈球菌的自溶作用而致菌落中央塌陷而邊緣隆起，而呈臍窩狀。

鑒定試驗

① 膽汁溶菌試驗：本試驗的原理基于膽鹽能夠通過活化肺炎鏈球菌的自溶酶而溶解肺炎鏈球菌，但不能溶解草綠色鏈球菌。常用的方法包括快速平板法和標準試管法。前者取一接種環(huán)2%去氧膽酸鈉溶液加于血平板待鑒定菌的菌落上，置35℃孵育15~30min,菌落溶解消失為陽性。而后者則是在1ml待鑒定菌18~24h培養(yǎng)液中加入2滴10%去氧膽酸鈉溶液,35℃孵育5-10min后鑒定菌管由混濁變?yōu)橥该髡邽殛栃浴?/p>

② 奧普托欣(Optochin)試驗：用以與其他草綠色鏈球菌相鑒別。用接種環(huán)將單個待鑒定菌落均勻涂于血平板上，用含量為5μg的optochin紙片貼于接種區(qū)中央,35℃需氧培養(yǎng)過夜，抑菌圈 >18mm的為陽性。本菌為陽性。

小鼠毒力試驗

若用有毒力的菌株接種小鼠，接種后12-36h,小鼠死亡。