抗血清純化的常用方法有哪些?
抗血清純化是免疫學研究中的一個重要環(huán)節(jié),其目的是從動物血清中去除非特異性蛋白質和其他雜質,以獲得高純度的目標抗體。常用的抗血清純化方法包括:
1. 鹽析法 這是最簡單的一種純化方法,通過改變溶液的離子強度來沉淀抗體,最常用的是硫酸銨鹽析。
2. 凝膠過濾層析 也稱為分子篩層析,是根據蛋白質分子大小的不同進行分離的方法。小分子可以通過凝膠顆粒內部的孔隙,而大分子則主要在顆粒外部移動,因此可以實現不同大小分子的分離。
3. 離子交換層析 利用抗體與固定相上的帶電基團之間的靜電相互作用來進行純化,適用于從血清中去除其他蛋白質成分。
4. 親和層析 是一種高效特異性的純化技術。它利用了抗原-抗體間的高度特異性結合能力,在固相載體上偶聯特定的配體(如抗原或蛋白A/G),當樣品通過該柱時,目標抗體就會被吸附在柱子上,而非目標物質則會流過。
5. 超濾法 適用于小體積樣本的濃縮和脫鹽處理。它利用半透膜對不同分子量大小的物質進行選擇性透過,從而達到分離純化的目的。
這些方法各有優(yōu)缺點,在實際應用中往往需要根據具體情況進行選擇或組合使用。
1. 鹽析法 這是最簡單的一種純化方法,通過改變溶液的離子強度來沉淀抗體,最常用的是硫酸銨鹽析。
2. 凝膠過濾層析 也稱為分子篩層析,是根據蛋白質分子大小的不同進行分離的方法。小分子可以通過凝膠顆粒內部的孔隙,而大分子則主要在顆粒外部移動,因此可以實現不同大小分子的分離。
3. 離子交換層析 利用抗體與固定相上的帶電基團之間的靜電相互作用來進行純化,適用于從血清中去除其他蛋白質成分。
4. 親和層析 是一種高效特異性的純化技術。它利用了抗原-抗體間的高度特異性結合能力,在固相載體上偶聯特定的配體(如抗原或蛋白A/G),當樣品通過該柱時,目標抗體就會被吸附在柱子上,而非目標物質則會流過。
5. 超濾法 適用于小體積樣本的濃縮和脫鹽處理。它利用半透膜對不同分子量大小的物質進行選擇性透過,從而達到分離純化的目的。
這些方法各有優(yōu)缺點,在實際應用中往往需要根據具體情況進行選擇或組合使用。
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