顯微鏡下如何準確計數紅細胞?
在顯微鏡下準確計數紅細胞,通常采用血細胞計數板(如Neubauer改良型計數板)進行。具體步驟如下:
1. 準備樣品:首先將血液稀釋到適當的濃度,一般情況下是用等滲的鹽水或者專門的稀釋液按一定比例稀釋,比如1:200的比例。
2. 加樣:使用微量移液器吸取少量稀釋后的血樣(通常為10微升),然后輕輕滴加至計數板的凹槽中。確保液體完全覆蓋計數區(qū)域但不要溢出。
3. 覆蓋蓋玻片:將專用的蓋玻片平穩(wěn)地放在計數板上,避免產生氣泡。
4. 顯微鏡觀察:選擇合適的放大倍率(通常為10x或20x),找到計數板上的特定區(qū)域進行觀察。Neubauer改良型計數板上有五個大方格區(qū),每個大格又分為16個小方格。一般選取四個角的大方格和中間的一個大格共5個區(qū)域來計數紅細胞。
5. 計數:在選定的區(qū)域內逐個計數所有可見的紅細胞。遵循“左不右、上不算下”的原則,即只計算位于邊界線左側或上方的細胞;若細胞正好落在兩條線相交處,則僅計算左上線和右下線上的細胞。
6. 計算濃度:根據所使用的稀釋比例及計數板的具體規(guī)格,將實際觀察到的數量轉換成每微升血液中的紅細胞數目。例如,如果Neubauer改良型計數板上5個區(qū)域共觀察到了N個紅細胞,并且是按照1:200的比例稀釋,則原血樣中每微升的紅細胞數量為:(N/5) 200 10^4。
7. 數據記錄與分析:將計算結果記錄下來,必要時進行多次重復實驗以提高準確性,并對數據進行統計學處理。
需要注意的是,在整個過程中要嚴格遵守無菌操作規(guī)范,避免污染樣本。此外,顯微鏡的清潔維護也很重要,保證視野清晰干凈有助于獲得更準確的結果。
1. 準備樣品:首先將血液稀釋到適當的濃度,一般情況下是用等滲的鹽水或者專門的稀釋液按一定比例稀釋,比如1:200的比例。
2. 加樣:使用微量移液器吸取少量稀釋后的血樣(通常為10微升),然后輕輕滴加至計數板的凹槽中。確保液體完全覆蓋計數區(qū)域但不要溢出。
3. 覆蓋蓋玻片:將專用的蓋玻片平穩(wěn)地放在計數板上,避免產生氣泡。
4. 顯微鏡觀察:選擇合適的放大倍率(通常為10x或20x),找到計數板上的特定區(qū)域進行觀察。Neubauer改良型計數板上有五個大方格區(qū),每個大格又分為16個小方格。一般選取四個角的大方格和中間的一個大格共5個區(qū)域來計數紅細胞。
5. 計數:在選定的區(qū)域內逐個計數所有可見的紅細胞。遵循“左不右、上不算下”的原則,即只計算位于邊界線左側或上方的細胞;若細胞正好落在兩條線相交處,則僅計算左上線和右下線上的細胞。
6. 計算濃度:根據所使用的稀釋比例及計數板的具體規(guī)格,將實際觀察到的數量轉換成每微升血液中的紅細胞數目。例如,如果Neubauer改良型計數板上5個區(qū)域共觀察到了N個紅細胞,并且是按照1:200的比例稀釋,則原血樣中每微升的紅細胞數量為:(N/5) 200 10^4。
7. 數據記錄與分析:將計算結果記錄下來,必要時進行多次重復實驗以提高準確性,并對數據進行統計學處理。
需要注意的是,在整個過程中要嚴格遵守無菌操作規(guī)范,避免污染樣本。此外,顯微鏡的清潔維護也很重要,保證視野清晰干凈有助于獲得更準確的結果。
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