產(chǎn)單核李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一種重要的食源性病原菌，它能夠引起人類(lèi)和動(dòng)物的嚴(yán)重感染。在實(shí)驗(yàn)室中，為了準(zhǔn)確地分離和培養(yǎng)這種細(xì)菌，通常會(huì)采用一系列特定的方法和技術(shù)。
1. 樣品處理：首先需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。如果是食品或環(huán)境樣本，可能需要先用緩沖鹽水等溶液稀釋?zhuān)⑼ㄟ^(guò)震蕩或攪拌來(lái)分散其中的微生物。臨床標(biāo)本如血液、腦脊液等則直接用于培養(yǎng)。
2. 選擇性增菌：將處理后的樣品接種到含有選擇性添加劑（如慶大霉素、亞碲酸鈉）的選擇性液體培養(yǎng)基中，這些成分可以抑制非目標(biāo)細(xì)菌生長(zhǎng)而促進(jìn)產(chǎn)單核李斯特菌的繁殖。常用的有半乳糖膽鹽肉湯（GBS）、李氏增菌液等。
3. 初步分離：經(jīng)過(guò)24-48小時(shí)于35-37°C條件下培養(yǎng)后，取少量增菌后的培養(yǎng)物劃線(xiàn)接種到選擇性平板上，如PALCAM瓊脂或Oxford瓊脂。這些平板含有特定的碳源和顯色劑，能夠幫助區(qū)分產(chǎn)單核李斯特菌與其他細(xì)菌。
4. 觀(guān)察菌落特征：在35-37°C下繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時(shí)后，觀(guān)察菌落在選擇性平板上的形態(tài)、顏色等特性。產(chǎn)單核李斯特菌通常會(huì)在PALCAM瓊脂上形成綠色至藍(lán)綠色的圓形菌落，在Oxford瓊脂上呈現(xiàn)灰色或淡紫色。
5. 確認(rèn)試驗(yàn)：從疑似菌落中挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，并通過(guò)一系列生化反應(yīng)（如觸酶測(cè)試、CAMP試驗(yàn)、β-半乳糖苷酶活性檢測(cè)等）以及分子生物學(xué)方法（PCR技術(shù)檢測(cè)特定基因序列）進(jìn)一步確認(rèn)其身份。
6. 藥敏測(cè)定：如果需要了解分離株的藥物敏感性，可以采用紙片擴(kuò)散法或者微量肉湯稀釋法進(jìn)行藥敏測(cè)試。

以上步驟是產(chǎn)單核李斯特菌在實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的分離培養(yǎng)流程。每一步都需嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行，并注意無(wú)菌技術(shù)以避免污染。