單克隆抗體生產的關鍵步驟有哪些?
單克隆抗體生產的流程較為復雜,但可以概括為以下幾個關鍵步驟:
1. 免疫動物:選擇合適的動物(通常是小鼠),用目標抗原對其進行免疫注射,以刺激其體內產生特異性抗體。
2. 脾細胞與骨髓瘤細胞融合:從已免疫的動物脾臟中獲取B淋巴細胞,并將其與腫瘤細胞(如骨髓瘤細胞)進行化學或生物方法誘導融合,形成雜交瘤細胞。這種細胞既具有無限增殖的能力又能夠分泌特異性抗體。
3. 篩選陽性克?。和ㄟ^選擇性培養(yǎng)基篩選出能穩(wěn)定產生所需單抗的雜交瘤細胞株,并采用有限稀釋法等技術進一步純化得到單一細胞來源的克隆。
4. 擴增和保存雜交瘤細胞:將篩選出來的優(yōu)質雜交瘤細胞在體外大規(guī)模培養(yǎng),或者將其注射到小鼠腹腔內形成腫瘤以獲得大量單抗。同時,可將部分細胞凍存起來備用。
5. 單克隆抗體的純化與鑒定:從培養(yǎng)液或血清中提取單抗,并通過親和層析、離子交換等方法進行純化;然后利用ELISA、Western Blot等技術對抗體的特異性及效價進行檢測確認。
6. 質量控制與穩(wěn)定性測試:對制備好的單克隆抗體進行全面的質量評估,包括其物理化學性質、生物學活性以及長期保存條件下的穩(wěn)定性能等方面的研究。
以上就是單克隆抗體生產的主要步驟,在實際操作過程中還需要嚴格遵守相關的實驗規(guī)范和安全標準。
1. 免疫動物:選擇合適的動物(通常是小鼠),用目標抗原對其進行免疫注射,以刺激其體內產生特異性抗體。
2. 脾細胞與骨髓瘤細胞融合:從已免疫的動物脾臟中獲取B淋巴細胞,并將其與腫瘤細胞(如骨髓瘤細胞)進行化學或生物方法誘導融合,形成雜交瘤細胞。這種細胞既具有無限增殖的能力又能夠分泌特異性抗體。
3. 篩選陽性克?。和ㄟ^選擇性培養(yǎng)基篩選出能穩(wěn)定產生所需單抗的雜交瘤細胞株,并采用有限稀釋法等技術進一步純化得到單一細胞來源的克隆。
4. 擴增和保存雜交瘤細胞:將篩選出來的優(yōu)質雜交瘤細胞在體外大規(guī)模培養(yǎng),或者將其注射到小鼠腹腔內形成腫瘤以獲得大量單抗。同時,可將部分細胞凍存起來備用。
5. 單克隆抗體的純化與鑒定:從培養(yǎng)液或血清中提取單抗,并通過親和層析、離子交換等方法進行純化;然后利用ELISA、Western Blot等技術對抗體的特異性及效價進行檢測確認。
6. 質量控制與穩(wěn)定性測試:對制備好的單克隆抗體進行全面的質量評估,包括其物理化學性質、生物學活性以及長期保存條件下的穩(wěn)定性能等方面的研究。
以上就是單克隆抗體生產的主要步驟,在實際操作過程中還需要嚴格遵守相關的實驗規(guī)范和安全標準。
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