ELISA檢測的基本原理是什么?
ELISA,即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay),是一種常用的免疫學(xué)檢測方法,主要用于測定血清、體液或其他生物樣本中的抗原或抗體。其基本原理是利用了抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)以及酶對底物的催化作用。
ELISA檢測可以分為直接法、間接法、夾心法和競爭法等幾種類型,但它們都基于相似的基本原理:
1. 首先將待測樣本中的目標(biāo)分子(如特定抗原或抗體)吸附到固相載體上,這個(gè)過程稱為包被。常用的固相載體有微孔板、珠子或者試管等。
2. 接著加入特異性的一級抗體,這種抗體能夠與目標(biāo)分子發(fā)生特異性的結(jié)合。如果是一次性檢測抗原,則直接使用針對該抗原的抗體;如果是檢測抗體,則需要先用已知抗原來捕獲待測樣本中的抗體。
3. 洗滌步驟去除未結(jié)合的物質(zhì)后,再加入標(biāo)記有酶(如辣根過氧化物酶HRP或堿性磷酸酶AP)的二級抗體。這種二級抗體能夠與一級抗體相結(jié)合,并且自身不會直接與目標(biāo)分子反應(yīng)。
4. 經(jīng)過再次洗滌以清除多余的未結(jié)合成分之后,向系統(tǒng)中添加適當(dāng)?shù)牡孜锶芤?。底物在酶的作用下會發(fā)生顏色變化,通過測量這一變化的程度(通常使用光密度值OD表示),可以間接反映出樣品中目標(biāo)分子的濃度。
5. 最后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定待測樣本中的具體含量。
整個(gè)過程依賴于抗原-抗體間的高親和力結(jié)合以及酶對底物的高度催化效率,從而實(shí)現(xiàn)對待測物質(zhì)精確而靈敏地定量分析。
ELISA檢測可以分為直接法、間接法、夾心法和競爭法等幾種類型,但它們都基于相似的基本原理:
1. 首先將待測樣本中的目標(biāo)分子(如特定抗原或抗體)吸附到固相載體上,這個(gè)過程稱為包被。常用的固相載體有微孔板、珠子或者試管等。
2. 接著加入特異性的一級抗體,這種抗體能夠與目標(biāo)分子發(fā)生特異性的結(jié)合。如果是一次性檢測抗原,則直接使用針對該抗原的抗體;如果是檢測抗體,則需要先用已知抗原來捕獲待測樣本中的抗體。
3. 洗滌步驟去除未結(jié)合的物質(zhì)后,再加入標(biāo)記有酶(如辣根過氧化物酶HRP或堿性磷酸酶AP)的二級抗體。這種二級抗體能夠與一級抗體相結(jié)合,并且自身不會直接與目標(biāo)分子反應(yīng)。
4. 經(jīng)過再次洗滌以清除多余的未結(jié)合成分之后,向系統(tǒng)中添加適當(dāng)?shù)牡孜锶芤?。底物在酶的作用下會發(fā)生顏色變化,通過測量這一變化的程度(通常使用光密度值OD表示),可以間接反映出樣品中目標(biāo)分子的濃度。
5. 最后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定待測樣本中的具體含量。
整個(gè)過程依賴于抗原-抗體間的高親和力結(jié)合以及酶對底物的高度催化效率,從而實(shí)現(xiàn)對待測物質(zhì)精確而靈敏地定量分析。
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