免疫測定中ELISA技術(shù)原理?
ELISA,即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay),是一種用于檢測特定抗原或抗體存在的高靈敏度和特異性的免疫學(xué)方法。其基本原理是利用固相載體上的抗原或抗體來捕獲待測樣本中的相應(yīng)成分,并通過一系列的結(jié)合反應(yīng),最終借助酶促底物顯色反應(yīng)來定性或定量地測定目標(biāo)物質(zhì)。
ELISA技術(shù)主要分為直接法、間接法、夾心法(雙抗體夾心法)、競爭法等幾種類型。下面簡要介紹這四種方法的基本原理:
1. 直接法:將已知的抗原固定在固相載體上,加入待測樣本中的特異性抗體使其與固定的抗原結(jié)合,再加酶標(biāo)記的第二抗體識別并結(jié)合到第一抗體上形成復(fù)合物。最后通過底物顯色反應(yīng)來判斷是否存在目標(biāo)物質(zhì)。
2. 間接法:首先將已知的抗原固定在固相載體表面,然后加入待測樣本中的特異性抗體使其與固定的抗原相結(jié)合。之后再用酶標(biāo)記的第二抗體(針對第一抗體)進(jìn)行識別和結(jié)合。最后通過底物顯色反應(yīng)來檢測目標(biāo)物質(zhì)。
3. 夾心法:此方法適用于檢測大分子量的目標(biāo)蛋白。首先將一種特定的捕捉抗體固定在固相載體上,然后加入待測樣本中的目標(biāo)抗原使其與固定的抗體相結(jié)合。隨后再加入另一種針對該抗原不同表位的酶標(biāo)記抗體形成“夾心”結(jié)構(gòu)。最后通過底物顯色反應(yīng)來檢測目標(biāo)物質(zhì)。
4. 競爭法:將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌泛痛郎y樣本同時加入含有固定化抗原(或抗體)的孔中,二者競爭性地與固相載體上的位點(diǎn)結(jié)合。由于標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌返牧渴枪潭ǖ?,因此可以通過比較它們之間結(jié)合程度的變化來推算出待測樣本中的目標(biāo)物質(zhì)濃度。
ELISA技術(shù)因其操作簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn),在臨床診斷、科學(xué)研究等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。
ELISA技術(shù)主要分為直接法、間接法、夾心法(雙抗體夾心法)、競爭法等幾種類型。下面簡要介紹這四種方法的基本原理:
1. 直接法:將已知的抗原固定在固相載體上,加入待測樣本中的特異性抗體使其與固定的抗原結(jié)合,再加酶標(biāo)記的第二抗體識別并結(jié)合到第一抗體上形成復(fù)合物。最后通過底物顯色反應(yīng)來判斷是否存在目標(biāo)物質(zhì)。
2. 間接法:首先將已知的抗原固定在固相載體表面,然后加入待測樣本中的特異性抗體使其與固定的抗原相結(jié)合。之后再用酶標(biāo)記的第二抗體(針對第一抗體)進(jìn)行識別和結(jié)合。最后通過底物顯色反應(yīng)來檢測目標(biāo)物質(zhì)。
3. 夾心法:此方法適用于檢測大分子量的目標(biāo)蛋白。首先將一種特定的捕捉抗體固定在固相載體上,然后加入待測樣本中的目標(biāo)抗原使其與固定的抗體相結(jié)合。隨后再加入另一種針對該抗原不同表位的酶標(biāo)記抗體形成“夾心”結(jié)構(gòu)。最后通過底物顯色反應(yīng)來檢測目標(biāo)物質(zhì)。
4. 競爭法:將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌泛痛郎y樣本同時加入含有固定化抗原(或抗體)的孔中,二者競爭性地與固相載體上的位點(diǎn)結(jié)合。由于標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌返牧渴枪潭ǖ?,因此可以通過比較它們之間結(jié)合程度的變化來推算出待測樣本中的目標(biāo)物質(zhì)濃度。
ELISA技術(shù)因其操作簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn),在臨床診斷、科學(xué)研究等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。
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