免疫學(xué)檢測(cè)中的ELISA技術(shù)基于什么原理?
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)是一種常用的免疫學(xué)檢測(cè)方法,主要用于檢測(cè)樣本中特定抗原或抗體的存在和濃度。其基本原理是利用了抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng),并通過酶催化底物顯色來放大信號(hào),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的定性或定量分析。
ELISA技術(shù)主要包括以下幾個(gè)步驟:
1. 包被:將已知的抗原(直接法)或者抗體(間接法、競(jìng)爭(zhēng)法等)固定在固相載體表面,如微孔板。
2. 封閉:加入封閉液覆蓋未結(jié)合的位置,以減少非特異性吸附對(duì)結(jié)果的影響。
3. 加樣:向微孔中加入待測(cè)樣品,如果樣品中含有目標(biāo)抗原或抗體,則會(huì)與包被物質(zhì)發(fā)生特異性結(jié)合。
4. 洗滌:去除沒有結(jié)合的成分以及可能存在的干擾物。
5. 結(jié)合酶標(biāo)二抗:對(duì)于間接法ELISA,需要添加能夠識(shí)別初級(jí)抗體并已經(jīng)標(biāo)記了酶的二抗;直接法則省略此步驟。
6. 顯色反應(yīng):加入底物后,在酶的作用下產(chǎn)生顏色變化。根據(jù)顯色程度的不同可以判斷樣品中目標(biāo)分子的含量。
7. 測(cè)定:使用分光光度計(jì)測(cè)定吸光值,從而計(jì)算出待測(cè)物質(zhì)的具體濃度。
ELISA技術(shù)因其操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn),在臨床診斷和科學(xué)研究領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。
ELISA技術(shù)主要包括以下幾個(gè)步驟:
1. 包被:將已知的抗原(直接法)或者抗體(間接法、競(jìng)爭(zhēng)法等)固定在固相載體表面,如微孔板。
2. 封閉:加入封閉液覆蓋未結(jié)合的位置,以減少非特異性吸附對(duì)結(jié)果的影響。
3. 加樣:向微孔中加入待測(cè)樣品,如果樣品中含有目標(biāo)抗原或抗體,則會(huì)與包被物質(zhì)發(fā)生特異性結(jié)合。
4. 洗滌:去除沒有結(jié)合的成分以及可能存在的干擾物。
5. 結(jié)合酶標(biāo)二抗:對(duì)于間接法ELISA,需要添加能夠識(shí)別初級(jí)抗體并已經(jīng)標(biāo)記了酶的二抗;直接法則省略此步驟。
6. 顯色反應(yīng):加入底物后,在酶的作用下產(chǎn)生顏色變化。根據(jù)顯色程度的不同可以判斷樣品中目標(biāo)分子的含量。
7. 測(cè)定:使用分光光度計(jì)測(cè)定吸光值,從而計(jì)算出待測(cè)物質(zhì)的具體濃度。
ELISA技術(shù)因其操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn),在臨床診斷和科學(xué)研究領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。
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