細菌染色步驟有哪些?
細菌染色是微生物學(xué)中一項重要的技術(shù),用于觀察和鑒定細菌。最常用的細菌染色方法是革蘭氏染色法,其基本步驟如下:
1. 制片 首先在干凈的載玻片上滴加一滴生理鹽水或蒸餾水,然后用接種環(huán)挑取少量待檢菌落,在水中均勻涂抹成薄膜。讓涂片自然干燥。
2. 固定 將制好的涂片通過火焰上方快速來回移動幾次(約3-5次),以加熱固定細菌于載玻片上。注意溫度不可過高以免破壞細胞結(jié)構(gòu)。
3. 初染 用結(jié)晶紫染液覆蓋整個樣本區(qū)域,染色1-2分鐘。
4. 水洗 傾斜玻片并輕輕沖洗掉多余的染料,去除表面未結(jié)合的色素。
5. 碘化物媒染 加碘液(盧戈氏碘液)于涂膜上作用約1分鐘,形成復(fù)合物使染色更加穩(wěn)定。
6. 再次水洗 傾斜玻片并輕輕沖洗掉多余的碘液。
7. 脫色 用95%乙醇或丙酮-酒精混合溶液脫色30秒至1分鐘。此步驟對于區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌至關(guān)重要:革蘭氏陽性菌會保持紫色,而革蘭氏陰性菌則會被脫色。
8. 復(fù)染 使用番紅染液復(fù)染約1分鐘。這一步是為了使被脫色的革蘭氏陰性菌恢復(fù)顏色,通常呈現(xiàn)為紅色或粉紅色。
9. 最終水洗 清除殘留的染料,并用吸水紙輕輕吸干載玻片邊緣多余的水分。
10. 封片與觀察 在涂膜上滴加一滴香柏油后蓋上蓋玻片,在顯微鏡下進行觀察。根據(jù)細菌的顏色和形態(tài)特征,可以初步判斷其屬于革蘭氏陽性還是陰性菌群。
以上就是細菌染色的基本步驟,不同實驗室可能在具體操作細節(jié)上有所差異,但大體流程相似。
1. 制片 首先在干凈的載玻片上滴加一滴生理鹽水或蒸餾水,然后用接種環(huán)挑取少量待檢菌落,在水中均勻涂抹成薄膜。讓涂片自然干燥。
2. 固定 將制好的涂片通過火焰上方快速來回移動幾次(約3-5次),以加熱固定細菌于載玻片上。注意溫度不可過高以免破壞細胞結(jié)構(gòu)。
3. 初染 用結(jié)晶紫染液覆蓋整個樣本區(qū)域,染色1-2分鐘。
4. 水洗 傾斜玻片并輕輕沖洗掉多余的染料,去除表面未結(jié)合的色素。
5. 碘化物媒染 加碘液(盧戈氏碘液)于涂膜上作用約1分鐘,形成復(fù)合物使染色更加穩(wěn)定。
6. 再次水洗 傾斜玻片并輕輕沖洗掉多余的碘液。
7. 脫色 用95%乙醇或丙酮-酒精混合溶液脫色30秒至1分鐘。此步驟對于區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌至關(guān)重要:革蘭氏陽性菌會保持紫色,而革蘭氏陰性菌則會被脫色。
8. 復(fù)染 使用番紅染液復(fù)染約1分鐘。這一步是為了使被脫色的革蘭氏陰性菌恢復(fù)顏色,通常呈現(xiàn)為紅色或粉紅色。
9. 最終水洗 清除殘留的染料,并用吸水紙輕輕吸干載玻片邊緣多余的水分。
10. 封片與觀察 在涂膜上滴加一滴香柏油后蓋上蓋玻片,在顯微鏡下進行觀察。根據(jù)細菌的顏色和形態(tài)特征,可以初步判斷其屬于革蘭氏陽性還是陰性菌群。
以上就是細菌染色的基本步驟,不同實驗室可能在具體操作細節(jié)上有所差異,但大體流程相似。
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