什么是工具酶呢?工具酶都有哪些呢?
什么是工具酶呢?工具酶都有哪些呢?快來跟著小編了解一下吧!
作為試劑用于測定化合物濃度或酶活力的酶稱為工具酶。
對于底物或產(chǎn)物不能直接測定或難于準確測定的酶促反應,采用酶耦聯(lián)法測定。
1.NAD(P)十或NAD(P)H偶聯(lián)的脫氫酶及其指示反應。
2.偶聯(lián)H2O2的工具酶及其指示反應
有些酶作用于底物時,可使其氧化產(chǎn)生H2O2,在POD的作用下使色素原氧化顯色進行測定。
(1)使單一的色素原顯色:色素原是一種無色的色素前身,在過氧化物酶(POD)存在下被H2O2氧化后可生成有色的色素。如鄰聯(lián)茴香胺(ODA)。
(2)使成對的色素原顯色:必須有兩個色素原共同存在,再在過氧化物酶(POD)的催化下生成色素。如酚和4-氨基安替比林作用,生成紅色色素。
(3)發(fā)光反應:H2O2也可用化學發(fā)光反應來監(jiān)測。
(六)標本采集要點及酶活性表示法
1.部分分析前因素對酶活性測定的干擾
1)溶血:部分酶在紅細胞膜或紅細胞內(nèi)的濃度遠高于細胞外,少量紅細胞的破壞就可能引起血清中酶明顯升高。
2)抗凝劑:有些抗凝劑是金屬螯合劑,可以抑制需要金屬離子的酶。如草酸鹽、檸檬酸鹽和EDTA等可抑制需Ca2+的AMY,也可抑制需Mg2+的CK,草酸鹽可以抑制催化氧化還原的酶,EDTA還能抑制ALP,這些抗凝劑分離的血漿一般不宜做酶活性測定。肝素可使γ-GT升高,使AMY下降,需加注意。
3)標本儲存溫度:
血清白蛋白對酶蛋白有穩(wěn)定作用,如無細菌污染,某些酶(如AST、γ-GT和ALP等)存在于白蛋白中可在室溫保存1~3天,而對活性影響不大。
有些酶極不穩(wěn)定,如血清前列腺ACP,在37℃放置1小時,活性可下降50%。大部分酶在低溫中可穩(wěn)定較長時間,標本如在離體后不能及時測定,應及時分離血清或血漿并置于冰箱冷藏。
2.標本采集要點
酶測定之前,標本要經(jīng)過采集、分離血清和儲存等過程,酶在血中是處于動態(tài)變化過程,血液離開體內(nèi)后,會有一定變化。其中任何一個階段處理不當,都有可能引起測定值變化。
(1)不能溶血:因大多數(shù)酶在血細胞中的含量比在血漿中高得多。如LDH高150倍,ALT高7倍。
(2)及時分離血細胞:防止血細胞內(nèi)酶大量進入血清;采血后1~2小時實驗室必須及時離心,分離血清。
(3)及時測定:防止酶蛋白變性,分離血清如不能及時測定,應放冰箱保存。
(4)盡量用血清標本:防止某些抗凝劑對酶的抑制作用(除非測定與凝血或纖溶有關的酶)。
(5)有些標本不能冷凍:有的酶在低溫下不穩(wěn)定。
有些酶如LD在融凍時被破壞,LD在低溫反而不如室溫穩(wěn)定,即所謂的“冷變性”。
3.酶活性表示法
酶活性的大小通常以酶單位數(shù)表示。
酶的國際單位:在實驗規(guī)定的條件下(溫度、最適pH、最適底物濃度時),在1分鐘內(nèi)催化1μmol底物發(fā)生反應所需的酶量為1個酶活力國際單位(U)。
能夠真正代表酶活性大小的是酶促反應初速度。
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