間接凝集反應(yīng)知識(shí)點(diǎn)來(lái)嘍!
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間接凝集反應(yīng)是將可溶性抗原(或抗體)先吸附于適當(dāng)大小的顆粒性載體表面,然后與相應(yīng)抗體(或抗原)作用,在適宜電解質(zhì)存在的條件下,出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象。
一、間接凝集反應(yīng)的類型
(一)正向間接凝集反應(yīng)
可溶性抗原致敏載體,用以檢測(cè)標(biāo)本中待測(cè)抗體的凝集反應(yīng),稱為正向間接凝集反應(yīng)。
(二)反向間接凝集反應(yīng)
特異性抗體致敏載體,用以檢測(cè)標(biāo)本中待測(cè)抗原的凝集反應(yīng),稱為反向間接凝集反應(yīng)。
(三)間接凝集抑制反應(yīng)
先將可溶性抗原(或抗體)與相應(yīng)的抗體(或抗原)混合,然后再加入抗原(或抗體)致敏的載體顆粒,若出現(xiàn)凝集現(xiàn)象,則說(shuō)明標(biāo)本中不存在相同抗原,抗體試劑未被結(jié)合。
若存在相同抗原,抗體與之結(jié)合,凝集反應(yīng)被抑制,稱為正向(或反向)間接凝集抑制試驗(yàn)。間接血凝抑制試驗(yàn)可用于檢測(cè)抗體也可測(cè)定抗原。
(四)協(xié)同凝集反應(yīng)
協(xié)同凝集反應(yīng)與間接凝集反應(yīng)的原理相類似,但所用載體為金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)。
SPA具有與IgG的Fc段結(jié)合的特性,因此當(dāng)這種葡萄球菌與IgG抗體連接時(shí),就成為抗體致敏的顆粒載體。如與相應(yīng)抗原接觸,即出現(xiàn)反向間接凝集反應(yīng)。協(xié)同凝集反應(yīng)也適用于細(xì)菌病毒的直接檢測(cè)。
二、間接血凝試驗(yàn)
(一)原理:抗原(或抗體)包被于紅細(xì)胞表面,成為致敏載體,然后與相應(yīng)的抗體(或抗原)結(jié)合,從而使紅細(xì)胞被動(dòng)的凝聚在一起,出現(xiàn)可見的紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。
(二)載體:最常用的為綿羊、家兔、雞的紅細(xì)胞及O型人紅細(xì)胞。
致敏的新鮮紅細(xì)胞只能使用2~3天。因此在致敏前先將紅細(xì)胞醛化,可長(zhǎng)期保存而不溶血。常用的醛類有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。紅細(xì)胞經(jīng)醛化后體積略有增大,兩面突起呈圓盤狀。
(三)致敏:致敏用的抗原或抗體要求純度高,并保持良好的免疫活性。
(四)血凝試驗(yàn):可在微量滴定板或試管中進(jìn)行,將標(biāo)本倍比稀釋,一般為1:64。凡紅細(xì)胞沉積于孔底,集中呈一圓點(diǎn)的為不凝集(-)。如紅細(xì)胞凝集,則分布于孔底周圍。以++凝集(紅細(xì)胞沉積于管底呈環(huán)狀,四周有凝集的小塊)的孔為滴度終點(diǎn)。
三、膠乳凝集試驗(yàn)
是一種間接凝集試驗(yàn),載體為聚苯乙烯膠乳,帶有負(fù)電荷,可物理性吸附蛋白分子,但這種結(jié)合牢固性差。
膠乳凝集試驗(yàn)分試管法和玻片法兩種。
四、明膠凝集試驗(yàn)
是一種間接凝集試驗(yàn),將病毒抗原或重組抗原吸附于粉紅色明膠顆粒上,當(dāng)致敏顆粒與樣品血清作用時(shí),若血清含有抗病毒抗體則可形成肉眼可見的粉紅色凝集。
該方法應(yīng)用于HIV-1抗體和抗精子抗體檢測(cè)等。
五、間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用
(一)抗原的檢測(cè)
反向間接凝集試驗(yàn)用于檢測(cè)病原體可溶性抗原,也可用于檢測(cè)各種蛋白質(zhì)成分。
(二)抗體的檢測(cè)
可用于檢測(cè)細(xì)菌、病毒和寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗體,例如間接凝集試驗(yàn)或明膠顆粒凝集試驗(yàn)用于檢測(cè)抗人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體以診斷艾滋病、膠乳凝集試驗(yàn)用于檢測(cè)抗溶血素等。
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